抗體保存注意事項 抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當(dāng)，大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。以abcam 抗體保存方法為主，同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分的抗體產(chǎn)品！ 1. 收到抗體后請務(wù)必在12000rpm 離心1-5min 后再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存！ 質(zhì)優(yōu)的抗體使用非常特殊的儲存管，只有在12000rpm 離心1-5min 才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來。即使是在10000rpm 離心也會導(dǎo)致離心不*，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象！ 2. 對于大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20 度 or -80 度對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20 度是*足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80度 會有更多的好處！ （1） 分裝可以zui大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。 （2） 分裝的量以一次實驗用完為好，zui少不能少于10ul 每份。因為分裝體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響 （3） 復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4 度，避免再凍起來！ （4） 抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4 度 盡量不要超過1 天。 （5） 避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門上 3. 大部分抗體收到后4 度短暫保存1-2 周對抗體活性是沒有影響的。 如果抗體很快（1-2 周）會使用，推薦在4 度保存，這是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害。 如果要長期保存則是在-20 度 or -80 度。zui關(guān)鍵的一點是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體！ 但是，腹水形式的產(chǎn)品請在收到后立即凍起來！因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在4 度保存會導(dǎo)致抗體的降解！ 4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過程需要1-2 周的時間，所以是在4 度的條件下來完成的。 4 度運(yùn)輸zui主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程）。所以運(yùn)輸過程中避免干冰運(yùn)輸！ 特殊抗體的保存條件： 1. 酶聯(lián)抗體：永遠(yuǎn)保存在4 度，避免凍起來。否則會導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失 2. 偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體，對光極為敏感，因此在所有的實驗階段也是要避光操作的！ 3. IgG3 的同型對照：永遠(yuǎn)保存在4 度，避免凍起來。因為如果出現(xiàn)凍融過程，該抗體非常容易形成多聚體 無論是保存還是運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融！ 反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力！ 抗體保存其它相關(guān)信息： 關(guān)于加入甘油保存：有些人會加50%的甘油到抗體中來避免反復(fù)凍融，甘油在-20 度 會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的。但是abcam 僅對非常小的一部分抗體檢測過其在這種條件下的穩(wěn)定性；而abcam 只對按照推薦條件保存的抗體提供質(zhì)量保證！加入甘油的溶液不建議在-80 度保存，因為這已經(jīng)超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話，請謹(jǐn)慎注意無菌操作，避免污染！ 關(guān)于蛋白保護(hù)劑： 蛋白在高濃度時更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），這就是為什么在抗體中加入BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。 關(guān)于*（sodium azide）的使用： 為了防止微生物污染，*經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度0.02% （w/v））。Abcam 的很多抗體已經(jīng)含有了0.02％-0.05%的*，在說明書的“Storage buffer”中有標(biāo)明的。 在下述情況中不能使用*： • 如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞，用于體內(nèi)研究： *在抵抗微生物的同時，對其它大部分有機(jī)物也是有毒的，因為它阻斷了線粒體的cytochrome electron transport system. • 要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體： *會干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián)，因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前，應(yīng)將*去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入*保存，但是濃度只能是0.01％。對于需要偶聯(lián)的抗體，thimerosal（merthiolate）可以替代*作為保護(hù)劑！ 注：*的去除方式： 可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除！IgG 的分子量是150kDa （IgM 是~ 600kDa）; *的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa 的濾膜即可將*從抗體中去除 |
